Wanneer Tiger Island wordt overgenomen door de kwaadaardige Wizpig, stuurt Timber een brief naar Diddy om zijn hulp in te roepen. Diddy, Dixie, Tiny Kong en de schurk Kremling Krunch komen opdagen om Timber en zijn vrienden Bumper, Tiptup en Pipsy te helpen.
Diddy Kong Racing DS is een remake van de gelijknamige Nintendo 64-game. Hoewel het verhaal en de setting hetzelfde blijven, is dit meer een upgrade dan een port. Spelers kunnen nog steeds racen over verschillende circuits rond Tiger Island via een kart, hovercraft of vliegtuig, races winnen om gouden ballonnen te verdienen om verder te komen en bazen verslaan om Wizpig te confronteren.
Er zijn subtiele aanpassingen gedaan aan de gameplay. Hoewel je je ballonnen nog steeds kunt levelen door een andere ballon van dezelfde kleur in een rij te verzamelen, verandert het verzamelen van een ballon van een andere kleur je wapen niet – je moet eerst je huidige wapen afvuren. De Silver Coin Challenge uit het originele spel is verwijderd uit het hoofdavontuur en is vervangen door een first-person touchscreen shooter waarin je rondvliegt op Taj’s magische tapijt en probeert zoveel mogelijk ballonnen te laten knappen. Er is ook een optionele racemodus waarin je racet door de stylus te gebruiken om het voertuig door een top-down map te leiden.
Het spel ondersteunt nu een valutasysteem voor de meeste ontgrendelbare items – langs de baan zijn munten geplaatst, die kunnen worden gebruikt om ‘wensen’ te kopen van Taj the Genie. Deze omvatten alles van nieuwe personages, exclusieve tracks, een aangepaste track-editor, gevechtsmodi om te ontgrendelen in multiplayer enzovoort. De DS-versie van Diddy Kong Racing ondersteunt ook uitgebreid multiplayer. Je kunt spelen met één gamecard of meerdere gamecards (tot maximaal acht spelers), of online tot maximaal zes spelers. Net als bij Mario Kart DS kun je je eigen aangepaste sticker ontwerpen en deze gebruiken als je visuele representatie voor wanneer je over de hele wereld racet.